教你學(xué)會(huì)細(xì)胞凍存技術(shù)

細(xì)胞凍存是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，以達(dá)到減少細(xì)胞代謝的作用，從而達(dá)到對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存進(jìn)行保種的目的，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用。目前，細(xì)胞凍存主要的技術(shù)為液氮冷凍法，實(shí)際凍存過(guò)程中，需要進(jìn)行梯度溫度凍存，并加入適量的保護(hù)劑以保證細(xì)胞內(nèi)外的水分不會(huì)形成冰晶造成細(xì)胞的損傷或死亡。

什么時(shí)候可以凍存細(xì)胞？

在準(zhǔn)備冷凍靶細(xì)胞之前，必須確保細(xì)胞處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，這可以通過(guò)以下指標(biāo)進(jìn)行觀察：

1）培養(yǎng)基的顏色和渾濁情況：

培養(yǎng)基的顏色可以指示細(xì)胞是否過(guò)度生長(zhǎng)（例如，如果細(xì)胞是黃色，則表示它們過(guò)度生長(zhǎng)）；介質(zhì)的渾濁度通常表明存在污染，不適合冷凍。

2）細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)間：

通常，建議將新恢復(fù)的細(xì)胞冷凍約兩周。如果細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)兩個(gè)月以上，性狀率會(huì)發(fā)生一些變化，此時(shí)的細(xì)胞不適合冷凍。

3）細(xì)胞的數(shù)目：

在凍存過(guò)程中，每只凍存管內(nèi)細(xì)胞最佳濃度為5x10^6個(gè)/ml—1x10^7個(gè)/ml，高密度或低密度對(duì)細(xì)胞存活率有一定影響。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量不足時(shí)，不建議冷凍細(xì)胞。