NK培養(yǎng)基過程有哪些需要注意的？

大量的臨床研究結果表明，NK細胞具有優(yōu)秀的抗腫瘤作用的同時也具備著良好的安全性，其臨床治療潛力也同時在行業(yè)中得到了更廣泛的關注，同時也使更多的人關注于NK培養(yǎng)基。

在進行NK細胞的培養(yǎng)實驗時，影響最終實驗結果的因素非常多。為了幫助客戶解決問題，友康根據(jù)以往經(jīng)驗，為大家整理了實驗過程中最容易被大家忽視但卻極易影響實驗結果的四個關鍵點，希望大家實驗路上能夠順風順水！

一、采血環(huán)節(jié)需注意：

1）為了避免抗凝劑占比過高影響自體血漿的使用，應使臍血中的抗凝劑占比低于30%。

如用采血袋采集血樣，建議使用100mL容量的采血袋。如果采血時用200mL采血袋，建議取出14mL 抗凝劑。

2）因為EDTA會影響NK細胞的激活與擴增，采集血樣時禁止使用 EDTA 抗凝的真空采樣管，可以選用肝素鈉抗凝的真空采血管。

二、培養(yǎng)基配制及補液：

1）激活培養(yǎng)基：200mL基礎+200uL YC00C。第0天配。D0-D5使用。

擴增培養(yǎng)基：1.8L基礎+1.8mL YC005。第7天配。D7開始使用。

2）培養(yǎng)基A：基礎培養(yǎng)基+YC005，第0天配。D0及D9后使用。

培養(yǎng)基B：基礎培養(yǎng)基+YC005+YC00C，第3天配。D3-D9使用。

3）每次補液時添加的培養(yǎng)基需預溫，用多少取多少，禁止將整瓶培養(yǎng)基預溫、禁止反復預溫。

4）培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，配成完全培養(yǎng)基后4°保存。

三、培養(yǎng)期間需注意：

1）使用TC處理水平較高的貼壁細胞培養(yǎng)瓶，2L體系套裝建議以2個T25瓶起始培養(yǎng)。

2）盡可能使用大體積的培養(yǎng)袋，促進細胞間的氣體交換，防止代謝廢物過多影響細胞增殖。

如采用1L培養(yǎng)體系，推薦使用2L培養(yǎng)袋；采用2L培養(yǎng)體系，推薦每個1L體系使用1.8L培養(yǎng)袋。

3）剛入袋時，一般細胞培養(yǎng)袋大而細胞液體積小，建議將培養(yǎng)袋對折使用（d7），選擇合適的底面積培養(yǎng)。

4）外周血的推薦接種密度為1.5-2E6cells/mL。

臍血UCBMC的推薦接種密度為2.5-3E6cells/mL。

四、避免細胞機械損傷：

1）細胞接種后，第1-3天會形成懸浮細胞小團，第3-5天絕大部分懸浮細胞團貼壁，不可將其晃起，第5-7天貼壁的細胞團變大、變多，這些都是正常的細胞形態(tài)。

2）培養(yǎng)前期一定不要吹打細胞團（D0-D5），以減少細胞機械損傷。